Introduzione al prodotto
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Nome del prodotto |
Gatto. NO. |
Spec. |
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2 x Master Mix PCR Fast Pfus |
G3305-01 |
1 ml |
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G3305-05 |
5×1 ml |
Descrizione/Introduzione del prodotto
Questa Fast Pfus PCR Master Mix è una premiscela per PCR pronta all'uso contenente DNA polimerasi Pfu modificata, dNTP e tampone di reazione PCR ottimizzato a una concentrazione di 2× per PCR di routine, PCR di colonie, PCR con modelli complessi e modelli ad alto GC. L'amplificazione PCR può essere eseguita aggiungendo solo il templato, i primer e ddH2O in modo che la concentrazione della soluzione Mix sia 1×. Forte capacità di amplificazione, elevata velocità di amplificazione, velocità di estensione fino a 5-15 s/kb, alta fedeltà, alta specificità, il prodotto di amplificazione è piatto. Al prodotto è stato aggiunto il colorante di caricamento e il prodotto amplificato può essere utilizzato direttamente per il rilevamento dell'elettroforesi su gel di agarosio.
Condizioni di conservazione e spedizione
Spedire con ghiaccio bagnato; Negozio a -20 grado, valido per 12 mesi. Evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti.
Contenuto del prodotto
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Componente |
G3305-01 |
G3305-05 |
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2 x Master Mix PCR Fast Pfus |
1 ml |
5×1 ml |
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Manuale |
Una copia |
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Protocollo/procedure del test
1. Sistema di reazione PCR consigliato
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Componente |
20 µl di RXN |
50 µl di RXN |
Concentrazione finale |
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Templatea |
Variabile |
Variabile |
come richiesto |
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Primer diretto (10 μM)b |
0.8 μL |
2 μL |
0.4 μM |
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Primer inverso (10 μM)b |
0.8 μL |
2 μL |
0.4 μM |
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2×Master Mix PCR Fast Pfus |
10 μL |
25 μL |
1× |
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(DMSO,facoltativo)c |
(0.6 μL) |
(1.5 μL) |
(3%) |
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ddH2O |
Aggiungere a 20 µl |
Aggiungere a 50 µl |
a: Quantità maggiori di template aumentano il rischio di generazione di prodotti PCR non specifici. Quantità inferiori di templato riducono la precisione dell'amplificazione. Se il modello è un plasmide o un batteriofago, si consigliano 50 ng-5pg aggiunti in 50 μL rnx. Se il templato è DNA genomico, si consiglia di aggiungere 250 ng-50ng in 50 μL di rnx. Se il modello è un cDNA, diluire il cDNA originale di 2-100 volte e il volume di cDNA diluito aggiunto alla reazione non supera il 10% del volume totale della reazione. Se il templtae è un fluido batterico o un campione di estratto grezzo, il volume aggiunto alla reazione non supera il 10% del volume totale della reazione. Quantità maggiori di templato tendono a portare ad un'amplificazione non specifica. Quantità inferiori di modello tendono a portare a una bassa efficienza di amplificazione della PCR.
b: L'intervallo di concentrazione del primer finale utilizzato è {{0}}.2-1.0 μM e si consiglia 0,4 μM. Una quantità insufficiente di primer può comportare una resa di amplificazione bassa o assente, mentre una quantità eccessiva di primer può determinare un'amplificazione non specifica.
c: Per il modello ad alto contenuto di GC, DMSO con non più del 10% del volume totale.
2. Condizioni di amplificazione PCR consigliate
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Fare un passo |
Temperatura |
Tempo |
Numero di cicli |
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Denaturazione inizialea |
98 gradi |
30 s-120 s |
1 |
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Denaturazione |
98 gradi |
5-10 s |
25-35 |
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Ricotturab |
50-72 grado |
10-30 s |
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Estensionec |
72 gradi |
{} s/kb |
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Proroga finale |
72 gradi |
{} min |
1 |
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Presa |
4-16 grado |
Per sempre |
a: Un tempo di pre-denaturazione di 30 s è adatto per la maggior parte dei modelli convenzionali; i modelli complessi possono essere denaturati per un massimo di 2 minuti.
b: Per l'amplificazione di modelli complessi, contenenti primer concatenati, il tempo di annealing può essere esteso fino a 30 s.
c: Il passo di estensione consigliato è 5-10 s/kb a 72 gradi per modelli semplici come plasmidi, 10-15 s/kb per modelli di DNA genomico di routine, 15-30 s/kb per modelli complessi .
Nota
1. Durante l'utilizzo, scongelare e mescolare accuratamente, dopo essere stato completamente scongelato può essere conservato in un luogo stabile a 4 gradi per almeno 2 settimane, evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti.
2. Per la vostra sicurezza e salute, indossate occhiali, guanti o indumenti protettivi.
Solo per uso di ricerca!
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