2 X Master Mix PCR Fast Pfus

2 X Master Mix PCR Fast Pfus
introduzione al prodotto:
Con alta fedeltà, il prodotto è terminale piatto
N. cat.:G3305-05
Marca: Servicebio
Specifiche: 1 ml
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Descrizione
Parametri tecnici

Introduzione al prodotto

 

Nome del prodotto

Gatto. NO.

Spec.

2 x Master Mix PCR Fast Pfus

G3305-01

1 ml

G3305-05

5×1 ml

 

Descrizione/Introduzione del prodotto

 

Questa Fast Pfus PCR Master Mix è una premiscela per PCR pronta all'uso contenente DNA polimerasi Pfu modificata, dNTP e tampone di reazione PCR ottimizzato a una concentrazione di 2× per PCR di routine, PCR di colonie, PCR con modelli complessi e modelli ad alto GC. L'amplificazione PCR può essere eseguita aggiungendo solo il templato, i primer e ddH2O in modo che la concentrazione della soluzione Mix sia 1×. Forte capacità di amplificazione, elevata velocità di amplificazione, velocità di estensione fino a 5-15 s/kb, alta fedeltà, alta specificità, il prodotto di amplificazione è piatto. Al prodotto è stato aggiunto il colorante di caricamento e il prodotto amplificato può essere utilizzato direttamente per il rilevamento dell'elettroforesi su gel di agarosio.

 

Condizioni di conservazione e spedizione

 

Spedire con ghiaccio bagnato; Negozio a -20 grado, valido per 12 mesi. Evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti.

 

Contenuto del prodotto

 

Componente

G3305-01

G3305-05

2 x Master Mix PCR Fast Pfus

1 ml

5×1 ml

Manuale

Una copia

 

Protocollo/procedure del test

 

1. Sistema di reazione PCR consigliato

Componente

20 µl di RXN

50 µl di RXN

Concentrazione finale

Templatea

Variabile

Variabile

come richiesto

Primer diretto (10 μM)b

0.8 μL

2 μL

0.4 μM

Primer inverso (10 μM)b

0.8 μL

2 μL

0.4 μM

2×Master Mix PCR Fast Pfus

10 μL

25 μL

(DMSO,facoltativo)c

(0.6 μL)

(1.5 μL)

(3%)

ddH2O

Aggiungere a 20 µl

Aggiungere a 50 µl

 

 

a: Quantità maggiori di template aumentano il rischio di generazione di prodotti PCR non specifici. Quantità inferiori di templato riducono la precisione dell'amplificazione. Se il modello è un plasmide o un batteriofago, si consigliano 50 ng-5pg aggiunti in 50 μL rnx. Se il templato è DNA genomico, si consiglia di aggiungere 250 ng-50ng in 50 μL di rnx. Se il modello è un cDNA, diluire il cDNA originale di 2-100 volte e il volume di cDNA diluito aggiunto alla reazione non supera il 10% del volume totale della reazione. Se il templtae è un fluido batterico o un campione di estratto grezzo, il volume aggiunto alla reazione non supera il 10% del volume totale della reazione. Quantità maggiori di templato tendono a portare ad un'amplificazione non specifica. Quantità inferiori di modello tendono a portare a una bassa efficienza di amplificazione della PCR.

b: L'intervallo di concentrazione del primer finale utilizzato è {{0}}.2-1.0 μM e si consiglia 0,4 μM. Una quantità insufficiente di primer può comportare una resa di amplificazione bassa o assente, mentre una quantità eccessiva di primer può determinare un'amplificazione non specifica.

c: Per il modello ad alto contenuto di GC, DMSO con non più del 10% del volume totale.

2. Condizioni di amplificazione PCR consigliate

Fare un passo

Temperatura

Tempo

Numero di cicli

Denaturazione inizialea

98 gradi

30 s-120 s

1

Denaturazione

98 gradi

5-10 s

25-35

Ricotturab

50-72 grado

10-30 s

Estensionec

72 gradi

{} s/kb

Proroga finale

72 gradi

{} min

1

Presa

4-16 grado

Per sempre

 

a: Un tempo di pre-denaturazione di 30 s è adatto per la maggior parte dei modelli convenzionali; i modelli complessi possono essere denaturati per un massimo di 2 minuti.

b: Per l'amplificazione di modelli complessi, contenenti primer concatenati, il tempo di annealing può essere esteso fino a 30 s.

c: Il passo di estensione consigliato è 5-10 s/kb a 72 gradi per modelli semplici come plasmidi, 10-15 s/kb per modelli di DNA genomico di routine, 15-30 s/kb per modelli complessi .

 

Nota

 

1. Durante l'utilizzo, scongelare e mescolare accuratamente, dopo essere stato completamente scongelato può essere conservato in un luogo stabile a 4 gradi per almeno 2 settimane, evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti.

2. Per la vostra sicurezza e salute, indossate occhiali, guanti o indumenti protettivi.

 

 

Solo per uso di ricerca!

 

 

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