Soluzione colorante Hoechst 33258 (pronta all'uso)

La formula molecolare di Hoechst 33258 è C25H24N6O·3HCl, il peso molecolare è 533,88 e il numero CAS è 23491-45-4. Hoechst 33258 è un colorante fluorescente blu che può penetrare nella membrana cellulare e la sua fluorescenza viene notevolmente migliorata se combinato con DNA a doppio filamento. La lunghezza d'onda massima di eccitazione è 346 nm e la lunghezza d'onda massima di emissione è 460 nm. Hoechst 33258 è comunemente usato per il rilevamento dell'apoptosi, la colorazione nucleare o la colorazione di routine del DNA. Può essere utilizzato per colorare i nuclei di cellule e tessuti fissi o di cellule e tessuti non fissati. Dopo la colorazione, può essere osservato al microscopio a fluorescenza o rilevato mediante citometria a flusso. Quando osservato al microscopio a fluorescenza, viene eccitato dalla luce ultravioletta, che è fluorescenza blu.

Questo prodotto è una soluzione pronta all'uso, la cui concentrazione è ottimizzata per soddisfare le esigenze di tutti i tipi di colorazione di routine.

Trasporto di ghiaccio bagnato; Conservare a 2-8 gradi al riparo dalla luce, valido per 6 mesi.

1. Per sezioni di cellule o tessuti fisse:

UN. Per i campioni di cellule o tessuti fissati, rimuovere la soluzione di fissaggio dopo la fissazione e lavare con PBS o altro tampone appropriato 2-3 volte, 3-5 min ogni volta (per il rilevamento delle cellule sospese, seguire la routine metodo operativo delle cellule sospese, centrifugazione e altre fasi da aggiungere in tutti gli esperimenti);

B. (Passaggio facoltativo) Se le cellule o i tessuti fissati devono essere trattati con la colorazione con immunofluorescenza, è necessario eseguire prima il trattamento pertinente, quindi eseguire la colorazione Hoechst 33258 dopo il trattamento;

C. Prelevare direttamente una quantità adeguata della soluzione colorante Hoechst 33258 del prodotto (tipo pronto) per coprire il campione e incubare a temperatura ambiente per circa 5 minuti al buio;

D. Rimuovere la soluzione colorante e lavarla con PBS o altro tampone appropriato 2-3 volte, 3-5 min ogni volta;

e. Dopo aver sigillato le piastre o posizionate direttamente sotto un microscopio a fluorescenza, la lunghezza d'onda di eccitazione era di 350 nm e la lunghezza d'onda di emissione era di 460 nm.

2. Per cellule viventi o tessuti in coltura:

UN. Aggiungere una quantità adeguata di soluzione colorante Hoechst 33258 (tipo pronto all'uso) alla coltura cellulare per coprire completamente il campione da colorare; generalmente, è necessario aggiungere 1 ml di soluzione colorante a un pozzetto di una piastra a pozzetti 6- e aggiungere 100 μL di soluzione colorante a un pozzetto di una piastra a pozzetti 96-. I campioni sono stati incubati per 10-20 minuti in un incubatore a 37 gradi.

B. Rimuovere la soluzione colorante e lavarla con PBS o altro tampone appropriato 2-3 volte, 3-5 min ogni volta;

C. Osservata direttamente al microscopio a fluorescenza, la lunghezza d'onda di eccitazione era di 350 nm e la lunghezza d'onda di emissione era di 460 nm.

Nota:

1. Tutti i coloranti fluorescenti presentano il problema dell'estinzione della fluorescenza. Si consiglia di scattare foto il prima possibile dopo la tintura. Per rallentare l'estinzione della fluorescenza, è possibile utilizzare un sigillante anti-fluorescenza (si consiglia G1401).

2. Indossare un camice da laboratorio e guanti monouso durante il funzionamento.

Solo per uso di ricerca!

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